工业葡萄糖检测方法

发酵过程常见工业葡萄糖检测方法，如菲林滴定法、氧化酶一偶联比色法(GOD POD法) 、气相色谱法 、高效液相色谱法，旋光法、生物传感器法。

菲林滴定法 

原理：还原糖可以将菲林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子，反应终点可以 由次甲基兰指示（蓝色消失形成砖红色），根据一定量的菲林试剂完全还原所需的还原糖量，可计算加入样品中的还原糖的含量。

1.试剂 菲林试剂甲液：称取69.3g硫酸铜晶体，用蒸馏水溶解，定容至1000ml 菲林试剂乙液：称取346g酒石酸钾钠，100g氢氧化钠，用蒸馏水溶解定容至1000ml 次甲基蓝溶液：1g次甲基蓝溶于100ml水 

2.仪器 水浴锅。

特点：手工操作，过程复杂，受到多种因素干扰，但是成本较低，所以目前仍为多数企业采用。

通过原理可以分析出本方法检测结果其实是还原糖，而非绝对的葡萄糖量。

氧化酶一偶联比色法

GOD-POD法即葡萄糖氧化酶法，可以用来测定葡萄糖。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体

 

4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。这一方法目前在临床上用于诊断糖尿病。由于可自动化操作，因此未来也可能应用于发酵液的检测。

HPLC法

莫海涛等建立了同时测定葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的高效液相色谱方法。样品经水超声波浸取，采用Hypersil NH2柱分离，流动相为乙晴／水(二者体积比为80：20)，用激光蒸发光散射检测器检测。结果表明：四者的线性范围分别为15～1 000，20

 

--1500，15～1000，12～1 000mg／L，检出限为4．5～6．0 mg／L，样品的加标平均回收率为92.9％～99.0％，相对标准偏差为1.9％～3.5％。与前者相比，HPLC检测的准确度和专一性更高。

旋光度法

在葡萄糖浓度与旋光度值的线性关系的考察中，精密称取适量经98～100℃干燥至恒重的纯葡萄糖，加水溶解并稀释，按照旋光光度法测定，旋光度a对浓度C回归，得到的回归方程。结果表明：当葡萄糖质量浓度为15.58～103.84 g／L时，具有良好的线性

 

关系。

生物传感器法

葡萄糖生物传感器的工作原理如下：葡萄糖首先在GOD催化作用下生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶(HRP)的催化作用下，将2价还原态电介质Os氧化成Os3+，氧化态电介质Os3+在较低工作电压下被还原，产生的还原电流与被测葡萄糖浓度呈线性关

 

系，通过检测还原电流即可得到对应葡萄糖浓度。

气相色谱法

采用气相色谱分析萄萄糖等多羟基化合物时，由于多羟基化合物极性大、沸点高，直接进样分析无法进行，所以多采用硅醚化试剂与羟基反应，生成易挥发、低极性、高稳定性的三甲基硅醚衍生物，再进行气相色谱分析。