工业葡萄糖检测方法
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发酵过程常见工业葡萄糖检测方法,如菲林滴定法、氧化酶一偶联比色法(GOD POD法) 、气相色谱法 、高效液相色谱法,旋光法、生物传感器法。
菲林滴定法
原理:还原糖可以将菲林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子,反应终点可以 由次甲基兰指示(蓝色消失形成砖红色),根据一定量的菲林试剂完全还原所需的还原糖量,可计算加入样品中的还原糖的含量。
1.试剂 菲林试剂甲液:称取69.3g硫酸铜晶体,用蒸馏水溶解,定容至1000ml 菲林试剂乙液:称取346g酒石酸钾钠,100g氢氧化钠,用蒸馏水溶解定容至1000ml 次甲基蓝溶液:1g次甲基蓝溶于100ml水
2.仪器 水浴锅。
特点:手工操作,过程复杂,受到多种因素干扰,但是成本较低,所以目前仍为多数企业采用。
通过原理可以分析出本方法检测结果其实是还原糖,而非绝对的葡萄糖量。
氧化酶一偶联比色法
GOD-POD法即葡萄糖氧化酶法,可以用来测定葡萄糖。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体
4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。这一方法目前在临床上用于诊断糖尿病。由于可自动化操作,因此未来也可能应用于发酵液的检测。
HPLC法
莫海涛等建立了同时测定葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的高效液相色谱方法。样品经水超声波浸取,采用Hypersil NH2柱分离,流动相为乙晴/水(二者体积比为80:20),用激光蒸发光散射检测器检测。结果表明:四者的线性范围分别为15~1 000,20
--1500,15~1000,12~1 000mg/L,检出限为4.5~6.0 mg/L,样品的加标平均回收率为92.9%~99.0%,相对标准偏差为1.9%~3.5%。与前者相比,HPLC检测的准确度和专一性更高。
旋光度法
在葡萄糖浓度与旋光度值的线性关系的考察中,精密称取适量经98~100℃干燥至恒重的纯葡萄糖,加水溶解并稀释,按照旋光光度法测定,旋光度a对浓度C回归,得到的回归方程。结果表明:当葡萄糖质量浓度为15.58~103.84 g/L时,具有良好的线性
关系。
生物传感器法
葡萄糖生物传感器的工作原理如下:葡萄糖首先在GOD催化作用下生成过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶(HRP)的催化作用下,将2价还原态电介质Os氧化成Os3+,氧化态电介质Os3+在较低工作电压下被还原,产生的还原电流与被测葡萄糖浓度呈线性关
系,通过检测还原电流即可得到对应葡萄糖浓度。
气相色谱法
采用气相色谱分析萄萄糖等多羟基化合物时,由于多羟基化合物极性大、沸点高,直接进样分析无法进行,所以多采用硅醚化试剂与羟基反应,生成易挥发、低极性、高稳定性的三甲基硅醚衍生物,再进行气相色谱分析。
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